田国标：猪肠系膜上动脉栓塞模型建立及血液学变化研究

田国标 狄长安 王艳明 金大庆 李卫民

【摘要】 目的 制作适合去栓治疗的急性肠系膜上动脉栓塞动物模型，研究模型血液学变化;方法 80只成年猪体外制作动物自体血凝块，采用介入方法将自体血凝块注入肠系膜上动脉，造成动脉栓塞，通过腹腔镜观察肠管血运，观察栓塞效果，监测D2聚体及CK; 结果 80只实验猪均成功建立急性肠系膜上动脉栓塞致肠缺血模型。栓塞后0.5h、1h、2h腔镜下观察肠管缺血情况，随栓塞时间的延长，肠管损伤逐渐加重，2h时肠管已缺血坏死。栓塞模型建立后CK早期明显升高，D2聚体持续上升，并有统计学意义。结论 采用本实验方法可成功建立适合后续去栓治疗研究的急性肠系膜上动脉栓塞动物模型。D2聚体、CK监测，有助于对肠系膜上动脉栓塞诊断。

【关键词】 肠系膜上动脉栓塞;动物模型;D2聚体及CK

肠系膜上动脉栓塞( superior mesenteric artery embolism， SMAE)是指栓子进入肠系膜上动脉，发生急性完全性血管闭塞。是外科急腹症中较少见疾病，但该病起病急，进展快，疾病早期无特异症状和体征，早期诊断比较困难，病情极其凶险，病死率极高，达70%～100%[1]。预后欠佳。本实验通过介入方法建立一种适合后续溶栓或取栓的动物模型，便于该病的研究。肠系膜上动脉栓塞发生时，血清酶学检查可见血清LDH、AKP、CK升高。近来发现检测D2聚体水平有助于肠系膜上动脉栓塞的诊断。本实验通过对肠系膜动脉栓塞模型血液中D2聚体及CK检测，证明D2聚体及CK有助于该病的诊断。

一、材料与方法：

1. 材料：80只成年猪，体重40-60公斤，雌猪60例，雄猪20例，均健康。

2. 方法：

2.1实验动物处置

实验用猪术前禁食12 小时，速眠新II注射液0.2ml/kg肌肉注射麻醉后固定手术台上，气管插管。腹部消毒，建立气腹，自脐上置入10mm穿刺器，建立观察孔，置入腔镜(便于观察肠管血运及蠕动情况)。股动脉穿刺区消毒，行股动脉穿刺，置入超滑导丝，导丝引导下置入RH肝管，选择进入肠系膜上动脉备用。

2.2血凝块制作

抽猪自体静脉20 ml，加入2.5ml 氨基已酸混合均匀，待其自凝。切成长条状备用。

2.3模型制作

经RH肝管将血凝块注入肠系膜上动脉，反复造影复查直至栓塞满意为止(主干远端及其分支不显影)。

2.4观察指标

2.4.1自腔镜观察0.5h、1h、2h肠管缺血情况。

2.4.2 分别于栓塞前、栓塞0.5h、1h、2h抽猪静脉血查D2聚体水平及CK。40例.栓塞前静脉运用肝素12500u。40例栓塞前不运用肝素。

2. 5 统计学方法

监测D2聚体水平及CK，数据采用SPSS 17. 0 统计软件处理，结果用x ± s 表示，多组间比较采用完全随机设计的单因素方差分析。P < 0. 05 表示差异有统计学意义，P <0. 01 表示有极显著差异。

二、 结果：

实验中80头猪均成功建立肠系膜上动脉栓塞模型，并成功采集血液样本。

1、肠系膜上动脉栓塞模型情况

腔镜下观察：a 栓塞前肠管红润，蠕动良好。b栓塞半小时后，肠管颜色无明显改变，浆膜表面有少量渗出，蠕动减慢：c栓塞1小时后，肠管蠕动消失，浆膜颜色苍白，可见较多渗出;d栓塞2小时后，肠管无蠕动，浆膜颜色晦暗，稍黑，剪开肠管，无出血，肠管粘膜苍白，证实肠管已缺血坏死。

2、D-二聚体变化情况

未用肝素，术前组、术后30 min组、1 h 组、术后2 h 组，Ddimer值两两比较均有显著差异，有统计学意义( P < 0. 01) 。术后各组运用肝素与未运用肝素两两比较，均有显著差异，有统计学意义( P < 0. 01) 。

二、 讨论：

肠系膜上动脉栓塞是一种少见的疾病，但其一旦发生，病情极其凶险，病死率极高。制作与人体相似的肠系膜动脉栓塞模型，为后续的治疗提供一定的平台，以便总结方法、经验，指导临床治疗。目前已有多种急性肠缺血的动物模型制作的报道。多数实验采用兔和老鼠等小动物多用于基础病理研究，而在影像学诊断及治疗方法临床应用前评价研究则多选择犬和猪等大动物[3,5,6]。选择那种动物来制备模型，必须考虑动物的大小与人类具有可比性,肠道血供和对缺血的耐受性应该与人类近似[7]。犬与人类肠系膜血管差异较大，犬的周围动脉弓和肠壁内存在丰富的侧支循环系统，栓塞肠系膜上动脉不易造成肠管缺血坏死[2]。而猪体积较大，肠系膜血管与人类较相似，故本实验选择猪做为制作模型的动物。

制作肠系膜动脉栓塞的方法有多种。早期，主要通过开腹手术、结扎或夹闭肠系膜上动脉建立急性肠缺血动物模型[3,4]。此类方法建立的模型存没有模拟机体急性肠系膜上动脉栓塞的临床现实，无法进行后续溶栓或取栓治疗，且创伤较大[8,9]。近些年来，随着介入放射学的快速开展，开始尝试微创介入方法建立急性肠缺血动物模型。通过股动脉穿刺选择性插管至肠系膜上动脉主干或其部分分支 经导管注射栓塞剂建立急性肠系膜上动脉栓塞肠缺血动物模型。常用的栓塞剂有不锈钢圈、明胶海绵、PVC 微球颗粒等[10,11]。 介入方法建立的急性肠缺血实验动物模型更接近临床现实，但运用上述栓塞剂，虽可成功建立缺血模型，但无法取出。这不能运于后续溶栓、取栓等治疗效果的评价。自体血凝块是目前公认的最客观 最真实 最理想的栓子，因为其形成过程与血管内血栓形成的过程相似。且自体血凝块质地疏松，适宜取栓及溶栓等后续治疗。本实验运用自体血凝块制作栓子。

以往，肠系膜动脉栓塞模型制备过程中，观察栓塞效果时，多采用反复开腹观察肠管血运情况及提取标本，创伤较大 影响对实验结果的观察。本实验采用腹腔镜技术，建立观察孔观察肠管血运情况，最大限度地减少了创伤对动物生理及对实验结果的影响。

本实验选用成年猪做为实验动物，自体血凝块最为栓子，通过微创介入方法制备肠系膜动脉栓塞模型，并运用腹腔镜方法观察效果。此方法创伤小，高度模拟了人体的环境，成功制备了肠系膜上动脉栓塞模型，并可模拟后续的取栓、溶栓的后续治疗。此模型的建立，为未接触或较少接触肠系膜上动脉栓塞患者治疗的医师提供操作技巧练习的平台。

现代影像学对于该病的早期发现具有明显的不足，相比之下，血清学及生化检查具有无创、快速、简便等优势[12]。D-dimer 是一种纤维蛋白单体的降解产物，由纤维蛋白溶解酶作用于血管内外交联纤维蛋白所产生。D-dimer 水平的升高在一定程度上反映出继发性纤溶活性的增强。D- dimer升高常提示受检者可能有血栓存在。本实验中，当栓塞模型建立30分钟后，D- dimer显著升高，并随着栓塞时间延长持续升高，表明在肠系膜上动脉栓塞时，D- dimer是一项比较敏感指标，有助于该疾病的诊断。实验发现，创建模型前经静脉给予肝素抗凝后，各观察时期D- dimer值较未加用肝素时均有明显下降。说明运用肝素可显著降低D- dimer数值，可间接证明运用肝素可有效的阻止血栓的蔓延，肯定了肝素抗凝在肠系膜动脉栓塞治疗中的作用。

据文献报道，肠系膜上动脉栓塞时，CK会显著升高。本实验发现，栓塞半小时后CK值明显升高，随着栓塞时间延长，CK值逐渐降至栓塞前水平。表明CK在栓塞早期显著升高，在肠系膜动脉栓塞早期诊断中有一定意义。

参考文献

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